(一)基因合成应用的领域
1. 组织样品中不易获得,但序列已知的基因
2. 无法通过钓鱼法获得,或cDNA 文库中不表达、表达量极低、很难通过PCR扩增获取的基因
3. 需经过密码子优化以提高外源表达量的基因
4. 用于微芯片的大量cDNA
5. 需要特定突变的基因
6. 自然界中还不存在对应蛋白的新基因
(二)公司服务特色
1. 免费提供实验设计方案,包括酶切位点设计、密码子优化等。
2. 基因合成周期短。
3. 基因克隆到通用载体或客户指定(提供)的表达载体上。
4. 提供DNA 测序结果,保证所合成的基因序列100%准确。
(三)基因合成技术流程:
1)客户提供基因序列信息
2)根据序列情况设计基因合成方案
3)客户认可方案,签订基因合成协议
4)引物合成、DNA片段拼接、全长基因克隆至载体
5)DNA测序验证合成基因,点突变修复错误位点
6)获得与提供序列完全一致的基因
(四)公司提供给客户的基因合成服务产品包括:
1. 高纯度质粒,大约2μg DNA
2. 含有重组质粒的菌液
3. 测序原始图谱
4. 序列比对文件
5. 质粒图谱及序列
(五)客户送样要求
1. 穿刺菌:请提供穿刺培养的单克隆菌落。穿刺菌可以长时间保存而不会导致质粒拷贝数的明显下
降。请在1.5ml 的Eppendorf 管中加入LB固体培养基(加有抗生素),然后用接种针挑取单菌落,穿
刺于固体培养基中。
2. 菌液:请将过夜培养的菌液加到装有灭菌甘油的1.5ml的Eppendorf管中至甘油终浓度为20%,
并注意封口,以免污染。
3. 质粒:请提供3~5μg溶于无菌去离子水的质粒溶液或者抽干的质粒。
4. 请提供质粒名称及抗性、载体等信息。
5. 若需要提供密码子优化服务(免费),请详细提供如下信息:
1)需要合成的DNA 或蛋白质序列。
2)序列两端的限制性酶切位点。
3)优化后的序列中需要避免的限制性酶切位点。
4)优化后的序列中需要保留的限制性酶切位点。
5)宿主表达系统相关信息。